一、gfp的载体
绿色萤光蛋白(Green fluorescent protein;简称GFP),由下村脩等人于1962年在维多利亚多管发光水母中发现,其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色萤光,整个发光的过程中还需要冷光蛋白质水母素的帮助,冷光蛋白质与钙离子(Ca2+)可产生交互作用。
2008年10月8日,日本科学家下村脩、美国科学家马丁·查尔菲和钱永健因为发现和改造绿色荧光蛋白获得了诺贝尔化学奖。
绿色萤光蛋白现常被用来研究骨架和细胞分裂、动力学和泡囊运输、发育生物学等,并可应用于转染细胞的确定、体内基因表达的测定、蛋白质分子的定位、细胞间分子交流的动态监测等
二、gfp载体构建
基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。 将目的基因与运载体结合的过程,实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体, 首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口,露出黏性末端。然后用同 一种限制酶切断目的基因,使其产生相同的黏性末端(部分限制性内切酶可切割出平末端,拥有相同效果)。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处,首先碱基互补配对结合,两个黏性末端吻合在一起,碱基之间形成氢键,再加入适量DNA连接酶,催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键,从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来,形成一个重组DNA分子。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合,形成重组DNA分子(也叫重组质粒)的。农杆菌可以做质粒载体的宿主细胞,但有些条件,比如必须是双子叶植物,或者是裸子植物~具体看链接吧,还有不懂的,追问吧
三、pegfp载体
pEGFP-C1是真核表达载体的一种,是空质粒。
表达绿色荧光蛋白和目的基因的融合蛋白,目的基因位于C端有否修改删除。
多克隆位点在GFP荧光蛋白基因之后,所以构建的融合蛋白,目的蛋白的N端连有GFP蛋白
四、gfp融合表达载体的构建
超表达是指将目的基因的全长序列与高活性组成型启动子融合构建成质粒载体,通过转化,获得该基因产物大量积累的生物体。 基因过表达的作用主要与基因本身编码蛋白的功能有关。一般来讲,过表达会导致该蛋白的含量增高,如果在细菌中过表达,有利于批量生产。假设这个蛋白与生物体抗性相关,如与植物抗旱有关,那么它的过表达可能会让植物更加抗旱
五、pgfp载体
PG、FP、LQ、MP都是表示手机电池的一种代码,是出厂检验时的一种标志
六、gfp的作用
荧光蛋白GFP发光原理:荧光蛋白发光类型属于斯托克斯位移型,其基本原理是生色团在较高能量的光子照射下发生构象的改变,从而导致分子能级变化,从高能级的构象跃迁向低能级时发出较低能量的光子。
生色团在发光过程中主要有两种化学过程。
一是质子转移,即质子化和去质子化,二是分子构象的改变。
七、gfp报告基因在植物基因功能中有何问题
1951年BarbaraMclintock首先在玉米中发现了控制元件,后来命名为转座元件或转座子(transposon)。
转座子是基因组中一段可移动的DNA序列,可以通过切割、重新整合等一系列过程从基因组的一个位置“跳跃”到另一个位置。这一元件不仅可用于分析生物遗传进化上分子作用引起的一些现象,还为基因工程和分子生物学研究提供了强有力的工具,可以在不了解基因产物的生化性质和表达模式的情况下,分离克隆植物基因,即转座子标签(transposontagging),又称为转座子示踪法。其原理是利用转座子的插入造成基因突变,以转座子序列为基础,从突变株的基因文库中筛选出带有此转座子的克隆,它必定含有与转座子序列相邻的突变基因的部分序列,再利用这部分序列从野生型基因文库中获得完整的基因〔1〕。1984年,用转座子标签法首先在玉米中分离了bronze基因,该基因编码了玉米花色素合成途径的关键酶——UDP-葡萄糖类黄3-O-葡萄糖基转移酶〔2〕。此后还利用转座子标签技术分离了许多植物基因。转座子可以分为两大类:以DNA-DNA方式转座的转座子和反转录转座子(retrotransposon)。第一类转座子可以通过DNA复制或直接切除两种方式获得可移片段,重新插入基因组DNA中。根据转座的自主性,这类元件又可以分为自主转座元件和非自主转座元件,前者本身能够编码转座酶而进行转座,后者则需在自主元件存在时方可转座,以玉米的Ac/Ds体系为例,Ac(Activator)属于自主元件,Ds(Dissociation)则是非自主元件,必需在Ac元件存在下才能转座〔1〕。第二类转座子又称为返座元(retroposon)〔3〕,是近年新发现的由RNA介导转座的转座元件,在结构和复制上与反转录病毒(retrovirus)类似,只是没有病毒感染必须的env基因,它通过转录合成mRNA,再逆转录合成新的元件整合到基因组中完成转座,每转座1次拷贝数就会增加1份,因此它是目前所知高等植物中数量最大的一类可活动遗传成分。目前共发现了3种类型反转录转座子:Tyl-copia类,Ty3-gypsy类和LINE(longinterspersednuclearClements)类转座子,前两类是具有长末端重复的转座子,LINE类转座子没有长末端重复。高等植物中的反转录转座子主要属于Tyl-copia类,分布十分广泛,几乎覆盖了所有高等植物种类〔4〕。克隆转座子主要有两条途径:其一,利用抗体识别或cDNA探针从野生型植株中获得表达量降低或不稳定基因座的序列,再从突变体中分离得到相应的转座子:其二是根据序列同源性,在基因组的不同位置分离同一家族的转座子成员。目前已经克隆的植物转座子约156种(来自Genbank的报告
八、gfp在植物基因工程中的作用
肿瘤是单克隆生长理论依据:6-磷酸葡萄糖脱氢酶的研究G6PD位于X染色体,是糖酵解的代谢酶,根据电泳技术分为A和B两种形式,由于女性两条X染色体在胚胎发育早期一条失活,一般细胞为G6PDA,一半为G6PDB。
而对女性肿瘤患者分析显示肿瘤细胞只表达一个等位基因,这说明肿瘤是单克隆生长的。肿瘤细胞单克隆起源的生物学意义在于区分肿瘤性增生和反应性增生肿瘤发生是多阶段逐步演化而成的,常涉及到不同然染色体多种基因的变化,包括癌基因、抑癌基因、细胞周期调节基因、凋亡基因以及DNA修复基因。
九、egfp载体
是。EGFP是GFP的一种变体,在蓝光激发下可以自发荧光,一种是作为标签,和其他蛋白融合表达,作为蛋白细胞亚定位的指示。除此还可以用来指示转染效率。
EGFP分子量是多少 目的:AMP-18是一小分子量蛋白质,独特表达于胃粘膜。据报道,该蛋白在正常胃组织.我们将构建的EGFP-AMP-18表达质粒转染BGC-823,
增强型的gfp (绿色荧光蛋白),激发后发射光更强 和gfp一个用法
十、简述gfp在生物学中的应用
绿色荧光蛋白GFP具有同宿主蛋白构成融合子的性质,利用这一性质,可以将GFP定位到特定的细胞器和膜系统中,进行细胞生理过程、细胞动力学等的实时观测,或直接应用于定量分析。
目前,GFP已经被成功地用于靶向标记包括细胞核、线粒体、质体、内质网等在内的细胞器。用GFP进行亚细胞定位,避免了提纯蛋白、标记异硫氰酸荧光素等荧光染料、经显微注射或其他方式导入细胞的复杂方法,从而使研究蛋白在活细胞的准确定位变得简单易行。
十一、pires-egfp载体
PUC 载体是在PBR322 质粒载体的基础上,插入一个在其5‘端带有一段多克隆位点的lacZ'基因,发展成有双功能检测特性的新型质粒载体系列。
类型有克隆载体、穿梭载体和表达载体,其中克隆载体常用的有pBR322和pUC18 、pUC19,穿梭载体和表达载体就要根据具体实验而定了。